可視化Transwell細胞趨化實驗前的攻略指南

　　細胞的趨化性被描述為細胞向趨化劑的定向遷移；趨化作用是無向的細胞遷移，在細胞經歷趨化作用時，它們會因某種物質而改變細胞的遷移速度但不會改變其遷移方向。

　　開始實驗前需要確認的問題：為了正確設置趨化性測定，需要先確認以下幾個重要問題。

　　1.您打算研究哪種細胞類型？

　　了解您感興趣的細胞類型--包括培養基要求和遷移速度--對于后續的檢測計劃至關重要。

　　2.所分析的細胞類型的遷移速度是多少？

　　雖然有些細胞遷移速度較慢(如腫瘤細胞或成纖維細胞)，但其他類型的細胞(如白細胞)遷移速度非常快。細胞遷移速度將決定實驗的持續時間和圖像之間所需的間隔。此外，梯度穩定性必須足夠高，以適應實驗的總持續時間。ibidi µ -Slide Chemotaxis 細胞趨化載玻片適用于慢速和快速遷移細胞的趨化性分析。

　　3.培養基是什么？

　　大多數細胞類型在含有胎牛血清(FCS)的培養基中培養，但它卻含有許多可以影響細胞遷移的因素，因此可能會改變趨化性測定的結果。例如，趨化劑對細胞遷移的影響可以被FCS誘導的影響所掩蓋。在開始測定之前逐漸降低培養基中的FCS濃度是克服這個問題的一種方法。此外，還開發了不含FCS的特殊無血清培養基。在開始測定之前，必須測試每種感興趣細胞類型的最佳培養基成分。

　　4.感興趣的細胞類型的最佳接種密度是多少？

　　接種密度取決于許多細胞因素，例如增殖速率、行為、形狀、上皮或間充質狀態以及對細胞與細胞接觸的依賴性。此外，在確定最佳細胞接種密度時必須考慮實驗持續時間。為了有足夠的可追蹤細胞，開始實驗時密度不能太低。在實驗結束時，單細胞應該是清晰可定義和可追蹤的。考慮到這些因素，在開始趨化性測定之前，應分別確定每種細胞類型的最佳接種密度。

　　5.應該進行多少次實驗？

　　通常，三到五次重復實驗足以從趨化組和相應的對照組創建重要數據。每個實驗應包含20-40個單細胞的跟蹤數據，這可以使用低放大倍率顯微鏡物鏡（例如5倍或10倍）來實現。

　　6.應該進行2D或3D趨化性分析嗎？

　　大多數細胞自然嵌入3D矩陣中。在趨化性測定過程中在2D環境中培養它們可能會改變它們的行為和遷移能力。為了克服這個問題，可以將細胞嵌入模仿其自然環境的3D基質中，例如膠原蛋白、基質膠或其他水凝膠。而細胞趨化載玻片非常適合2D和3D實驗。

　　7.實驗中必須包括哪些對照？

　　為了正確分析趨化性實驗，至關重要的是包括不含任何趨化劑的陰性對照 (-/-)，以及整個室中含有趨化劑的陽性對照 (+/+)。

　　在使用細胞趨化載玻片時，由于梯度以外的所有條件都是對稱的，因此需要較少的控制測量。這允許相互獨立地分析趨化性和趨化運動。在該實例中，趨化劑誘導癌細胞的趨化性和趨化運動。